U-Blot® PVDF 印迹膜（0.2 μm）
U-Blot® PVDF印迹膜是一种聚偏氟乙烯 (PVDF) 微孔膜，用于从各种凝胶基质中转移蛋白质。与硝酸纤维素膜相比，它具有更佳的操作性能。

U-Blot® PVDF 印迹膜（0.2 μm）是一种聚偏氟乙烯 (PVDF) 微孔膜，用于从各种凝胶基质中转移蛋白质。与硝酸纤维素膜相比，它具有更佳的操作性能。

这款疏水膜有两种孔径：0.45μm 和 0.2μm，使其能够结合各种分子量范围的蛋白质：

• 0.45μm孔径：适用于大多数蛋白质，提供更高的检测灵敏度。

• 0.2μm孔径：适用于分子量小于20,000的蛋白质，确保更好地吸附和保留小分子蛋白质。

U-Blot® PVDF印迹膜具有出色的蛋白质保留性、高物理强度和广泛的化学相容性，使其成为免疫测定的选择。

U-Blot® PVDF 印迹膜（0.2 μm）

1. 用SDS PAGE凝胶分离蛋白质样品和蛋白Marker。

2. 小心地裁切和放置凝胶，并将凝胶在冷转移缓冲液中平衡5~20分钟。

3. 将膜和滤纸切成适合凝胶的尺寸。将PVDF膜在甲醇中预湿20秒，直至其从不透明的白色变为均匀的半透明灰色，然后浸泡在超纯水中1-2分钟，去除试剂残留；随后在冷转移缓冲液中平衡2-3分钟，直至可以使用。

使用提醒：

膜润湿后，请勿使其变干。如果膜部分变干（变成不透明的白色），也必须重新润湿。

4. 依次组装转印装置，转印夹子→海绵垫→滤纸→预湿的膜→裁切好并预湿的凝胶→滤纸→海绵垫→转印夹子，每放置一层要注意避免起皱、折叠或存在气泡（可利用切胶板等工具轻轻赶压气泡，使每层紧密贴合）

5. 按照所用转印装置说明设置运行条件等，开始转印。

6. 转印结束后，取出印迹膜，并在超纯水中短暂冲洗去除凝胶碎屑。印迹膜可以风干储存，也可以立即使用用于免疫检测步骤。

成功进行蛋白质印迹实验的一些关键因素，例如蛋白质浓度、封闭液和抗体浓度，可能需要在以下方案中进行优化。

标准免疫检测

1. 如果印迹膜已干，请将其重新浸湿，浸泡在甲醇中 15 秒，或直至其颜色从不透明的白色变为半透明的灰色。

2. 用超纯水冲洗印迹膜 1 分钟。

3. 将印迹膜放入封闭缓冲液中，轻轻搅拌孵育 1 小时。

4. 将一抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

5. 将印迹膜放入稀释的一抗溶液中，室温孵育 1 小时（或 4°C 过夜），轻轻搅拌。

6. 使用洗涤缓冲液（含 Tween®-20 表面活性剂的缓冲液（TBST 或 PBST））洗涤印迹膜 3-5 次，每次 5 分钟。

7. 将二抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

8. 将印迹膜放入稀释的酶标记二抗溶液中，室温孵育1小时。

9. 用洗涤缓冲液洗涤印迹膜3-5次，每次5分钟。

10. 将印迹膜放入干净的容器中，并加入相应的检测试剂。

11. 按照检测所用试剂说明书操作，孵育1-5分钟。

（1） 对于HRP或AP化学发光试剂，将印迹膜暴露于X光胶片或使用成像系统获取数字图像。

（2）对于显色检测，加入试剂并等待信号出现。