RPMI 1640 培养基使用注意事项

PMI 1640 培养基，不含酚红相比其他培养基之所以具有独te的效果，是因为其中含有还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI 1640 培养基含有生物素、 维生素 B12 以及 PABA，这些成分是 Eagle’s MEM 和DMEM所不具备的。此外，该培养基之中还含有高浓度的维生素肌醇和胆碱。RPMI 1640 培养基不含蛋白质、脂质或生长因子。因此，RPMI 1640 培养基需要添加剂，通常采用 10% 胎牛血清 (FBS)。RPMI 1640 培养基使用碳酸氢钠缓冲体系 (2.0 g/L)，因此需要 5–10% CO2 的环境来维持生理 pH 值。

因为RPMI1640培养基的特殊环境，所以在使用时需要注意以下步骤：

1、使用前

• 从 2–8℃ 取出，恢复至室温再用，不要冷液直接加细胞。

• 检查：颜色粉红 / 淡红、清亮、无沉淀、无浑浊。

• 常规需添加：

• 10% 胎牛血清 FBS

• 1% 双抗（青霉素 - 链霉素）（可选）

• 所有添加都在超净台无菌操作。

2、培养条件

• 必须在 37℃、5% CO₂ 培养箱。

• 培养瓶 / 板不要拧太紧，保证气体交换。

• 颜色变紫：CO₂ 不足或偏碱。

• 颜色变黄：偏酸，多为细胞过密或污染。

3、操作要点

• 换液沿瓶壁缓慢加，不要直冲细胞。

• 悬浮细胞可半量换液；贴壁细胞先弃旧液、PBS 轻洗再加新液。

• 避免剧烈摇晃产生气泡。

4、污染判断

• 液体浑浊

• 有絮状、片状沉淀

• 异味

• 镜下有大量细菌、真菌、运动小颗粒

5、保存

• 未开封：2–8℃ 避光。

• 已加血清 / 双抗：4℃ 1–2 周内用完。

• 严禁反复冻融、长期室温放置。

6、废弃

• 用过 / 污染的培养基 高压灭菌后再丢弃，防止污染环境和其他细胞株。